Del original en idioma Ingles:
Dr. Günter Scheuerbrandt
Im Talgrund 2
D-79874 Breitnau
Alemania
Tel.: +49-7652-1777, Fax: +49-7652-91813-13
e-Mail: gscheuerbrandt@t-online.de
Internet: http://www.duchenne-investigacion.com
Traducción y adaptación bajo permiso del autor
por:
Ricardo Rojas C.
¡Enfréntela! ¡Vívala! ¡Cámbiela! Éste era el título de la Conferencia
Anual del Parent Project Muscular Dystrophy (PPMD) que tuvo lugar del 13 al 16
de Julio del 2006, en Cincinnati / Ohio/EUA. Treinta y seis científicos y
especialistas expertos en enfermedades musculares presentaron, primero, reseñas
sobre el conocimientos entero de distrofia muscular Duchenne y sobre los
diferentes acercamientos para una terapia (¡Enfréntela!), seguido de
recomendaciones para el manejo médico de nuestros niños enfermos (¡Vívala!),
y, finalmente, sus más recientes resultados de investigación que se acercan mas
y más a un tratamiento eficaz (¡Cámbiela!). Yo, Günter Scheuerbrandt, un
bioquímico de Alemania, se me pidió por Patricia Furlong, la
fundadora y presidenta del PPMD, escribir este informe para usted, los chicos y
sus familias, que desean estar al tanto de cada paso exitoso en el camino a un
tratamiento eficaz.
El informe contiene los resúmenes de solamente las
presentaciones científicas porque no soy un experto clínico. No es una
publicación científica, esta escrito en un lenguaje que usted podrá comprender.
Las expresiones científicas más importantes son explicadas al inicio y las otras
después, cuando son usadas por primera vez.
Todos los científicos cuyas presentaciones son parte de este
informe, han tenido la oportunidad ver el borrador de mi texto y corregirlo si
es necesario, y todos lo han hecho. Así que, debe haber pocos errores dejados.
Al principio de los resúmenes, estoy usando los nombres de
los científicos sin sus títulos, la mayoría son profesores y todos tienen un
postgrado o título medico o ambos. Y casi todos son jefes de laboratorios, eso
quiere decir que tienen colegas y postdoctorados y estudiantes que trabajaban
como un equipo en los proyectos reportados aquí, pero es imposible mencionar
todos sus nombres.
Esta terrible enfermedad, la distrofia muscular Duchenne,
lentamente abre su grillete, esto fue obvio después que escuchamos las
presentaciones de tantos nuevos resultados de investigación. Está siendo
conquistada paso a paso por personas dedicadas que trabajan para nosotros en
muchos países. El siguiente texto le muestra por qué.
Introducción
El informe empieza con mis párrafos con algunos hechos básicos para comprender
cómo los genes hacen proteínas, por qué la distrofina es tan importante, cuales
acercamientos de investigación son activamente seguidos, y cómo funciona la
omisión de exón, actualmente - en mi opinión - el más avanzado de estos
enfoques. En el encuentro, Lee Sweeney de la Universidad de
Pennsylvania en Filadelfia, Dominic Wells del Colegio Imperial en
Londres, y Steve Wilton de la Universidad de Australia Occidental
en Perth dieron introducciones muy detalladas de estos cuatro temas. Incluí
muchas de sus explicaciones, pero no todas en estos primeros párrafos para
mantener las contribuciones de cada uno de ellos separadamente. Después de esta
sección introductoria, la presentación de cada científico es resumida
separadamente, en algunos casos con explicaciones adicionales.
¿Cómo hacen proteínas los genes? Los genes son unidades
funcionales de material genético de ácido desoxirribonucleico, ADN. Su
estructura parece una escalera de mano entrelazada, la doble hélice. Los
niveles de esta escalera de mano constan de cuatro moléculas pequeñas
diferentes, las bases: adenina, guanina, timina, y citosina
(abreviadas A, G, T, C). Por razones espaciales, los niveles pueden contener
solamente dos tipos de combinaciones de bases, los pares de bases A-T y
G-C. Por lo tanto, la secuencia de las bases sobre un pasamano o hebra de
ADN es complementaria a la secuencia de la otra.
Esta secuencia de bases, o de "letras genéticas", es la
información genética para el desarrollo y mantenimiento de un organismo viviente
que es pasada de una generación a la próxima.
La mayoría de los genes llevan las instrucciones para la construcción de
proteínas. En el núcleo de la célula, la instrucción genética de genes
activos es expresada, es copiada, y transcrita, a otra sustancia
genética, al ácido ribonucleico pre-mensajero o ARNpre-m, proceso
llamado trascripción. La mayoría de los genes constan de regiones activas, los
exones, que contienen la información para la creación de las proteínas, y
de otras regiones "inactivas", los a menudo mucho más largos intrones,
que no obstante pueden ser importantes para el control de la expresión génica.
Después de la trascripción, los intrones son retirados del ARN pre-mensajero, y
los exones son empalmados para formar el ARN mensajero, ARNm, que
se traslada entonces a los ribosomas, la estructura sintetizadora de
proteínas fuera del núcleo. Los ácidos ribonucleicos, los ARNs, usan la
base U, uracilo, en lugar de la similar base T del ADN. Los Sitios de
empalme son secuencias específicas dentro de los exones y en los bordes de
los exones e intrones que son esenciales para el retiro correcto de las
secuencias sin codificación del intrón del ARNpre-m. El empalmado por si mismo
es logrado por los spliceosomas, un complejo de muchas proteínas y
pequeños ARN´s.
En el ARN mensajero, tres bases consecutivas, un codón,
tripleta, o "palabra genética", especifican, con tres excepciones, uno de
los 20 aminoácidos diferentes, de acuerdo con el código genético.
No hay ningún espacio entre los codones. En los ribosomas, el código de palabras
genéticas del ARN mensajero es leído y traducido en el lenguaje de las
proteínas, las cuales están construidas de muchos, a menudo miles, de
aminoácidos, sus componentes de construcción.
Las tres excepciones mencionadas son las tripletas UAA, UAG, y UGA, que son
codones de parada, donde el ensamblaje de la proteína se detiene.
El gen y la proteína distrofina: Las distrofias musculares Duchenne y
Becker son causados por una mutación o daño del gen de la distrofina
que lleva la información para las diferentes formas de la proteína
distrofina. Con una secuencia de 2, 220,223 bases, es con mucho el gen
humano conocido más grande. Solamente 11,058 bases, el 0.5 %, en los 79 exones
del gen de la distrofina especifica la secuencia de los 3,685 aminoácidos de la
proteína distrofina “normal” en los músculos esqueléticos. El gen tiene siete o
posiblemente ocho diferentes promotores, secuencias de bases que regulan
la unión de las proteínas y así, activar el gen permitiendo la trascripción de
su información para producir finalmente su proteína. Debido a los muchos
promotores y empalmes alternativos, muchas formas diferentes adicionales
de distrofina existen, todas ellas son más pequeñas de la normal en los
músculos. Éstas están ubicadas en los diferentes órganos, uno de ellos en el
cerebro. Esta forma es solamente 32 % de largo de la normal, y también puede ser
afectada por mutaciones. Esto podría ser la razón para los problemas cognitivos
de algunos chicos con Duchenne.
El tamaño del gen y la proteína distrofina: La estructura de doble hélice
del gen de la distrofina tiene 0.75 mm de largo. Junto con los otros cerca de
25,000 genes humanos, esta empacado en un núcleo celular de un diámetro de cerca
de 0.01 mm solamente porque el material genético esta empacado muy
apretadamente. Una molécula de distrofina de extensión completa es mucho más
corta que su gen, de 125 nm (= 0.000125 milímetros) de largo, 80,000 de ellos
colocados extremo con extremo en una línea recta cubriría sólo un centímetro. Y
en un gramo de músculo, hay 114 mil millones moléculas de distrofina. Esto puede
ayudar a apreciar la tarea de los científicos: parar detener la enfermedad, para
hacer que los músculos funcionen otra vez, un gran porcentaje del número normal
de las distrofinas tienen que aparecer otra vez después que el gen dañado no
puede hacerlas más. Las nuevas distrofinas no tienen que tener la misma forma
exactamente, pueden ser más pequeñas, pero deben poder trabajar apropiadamente.
¡Y eso quiere decir que miles de millones de nuevas distrofinas tienen que
volver a cada gramo de músculo, y un niño tiene muchos kilogramos de ellos!
El papel de distrofina: La distrofina es necesaria para la estabilidad
mecánica de las células musculares. Está ubicada en el interior de las membranas
de la célula muscular. Uno de sus extremos, la terminal-C, está unido a
un grupo de otras proteínas en la membrana, el complejo
distrofino-glicoproteico, y el otro extremo, la terminal-N, se
conectan a las estructuras contráctiles dentro de las células musculares. La
parte central de la distrofina, dominio de varilla (rod domain), consta
de cadenas de aminoácidos enroscadas que se doblan sobre si mismas varias veces.
Si el movimiento de contracción de la célula muscular forza a la proteina
distrofina a cambiar su longitud, su estructura doblada permite que ella actúe
como un resorte o como un absorbedor de choques. Por lo tanto, la distrofina
transmite la energía mecánica producida por el "aparato de contracción" de
actina-miosina hacia las membranas de la célula muscular y las estructuras fuera
de los músculos, el tejido conectivo y los tendones, en una manera equilibrada
que no los somete a demasiado esfuerzo.
La distrofina tiene más papeles: organiza la compleja estructura del complejo
distrofino-glicoproteico y la ubicación de muchas otras proteínas. También
regula procesos complicados como el mantenimiento de la cantidad correcta de
calcio en las células y aquellas sustancias que controlan el crecimiento de los
músculos. Muchos detalles de estas interacciones intrincadas entre numerosos
componentes en una célula viviente todavía son desconocidos.
Los chicos Duchenne no tienen o tienen muy poca distrofina en
sus fibras musculares. Cuando sus efectos protectores y organizadores están
faltantes, la contracción del músculo causa la ruptura de las membranas
musculares, y esto permite que cantidades grandes de calcio circulen en las
fibras. El excesivo calcio activa enzimas como la calpaína y otras
proteasas que deshacen las proteínas musculares e inician programas de muerte
celular. Las consecuencias son una cadena de los eventos como la inflamación y
la activación de fibroblastos que resultan en fibrosis, tejido
cicatrizante, que disminuye la velocidad de regeneración del músculo y causa los
típicos síntomas de los pacientes con Duchenne mayores.
Los chicos con distrofia Becker de progresión más lenta mayormente tienen
cantidades menores a lo normal de distrofina y a menudo también más corta de lo
normal. Esta todavía puede cumplir su papel, pero no trabaja tan eficazmente
como la versión normal.
Pero no solamente los músculos esqueléticos sufren cuando la
distrofina está faltante, como comento Andrew Hoey, sino también
los músculos lisos y cardiacos. El daño para los músculos de corazón causa
cardiomiopatía, y la debilidad de los músculos lisos tiene muchas consecuencias,
entre otros la habilidad reducida de los vasos sanguíneos a relajarse cuando el
flujo de sangre aumenta resultando en problemas respiratorios y otros, y también
el tracto gastrointestinal es afectado cuando la motilidad de los intestinos es
reducida. Así que el cambio en sólo un gen puede afectar todo el cuerpo.
Las mutaciones del gen de la distrofina: Hay tres tipos de mutaciones del
gen de la distrofina: deleciones, si uno o mas exones enteros del gen
están faltantes, duplicaciones, si partes del gen están repetidas, y
mutaciones puntuales, si un solo par de bases esta cambiado, eliminado o
añadido. Otras son inversiones y mutaciones en los intrones que modifican los
patrones normales de empalmado.
Como los codones de tres letras del ARN mensajero son leídos
en los ribosomas uno después de otro sin interrupción, este marco de lectura
no es alterado, cuando mutación elimina o añade codones enteros de tres pares de
bases por vez. En este caso, el marco de lectura se mantiene en orden y
la distrofina puede ser hecha todavía pero esta será más larga o más corta de lo
normal.. Si este cambio afecta solamente estructuras no-esenciales de la
distrofina, puede ser en parte funcional y por lo tanto, da lugar a distrofia
Becker menos severa.
Sin embargo, si la mutación cambiara el marco lectura por uno
o dos pares de bases, el marco de lectura pierde su orden. Entonces, un
número de aminoácidos incorrectos son incorporados en la proteina empezando en
el sitio de la mutación hasta que finalmente un nuevo y prematuro codón de
parada es alcanzado. La distrofina incompleta no puede cumplir su función
normal, desaparece y la distrofia muscular Duchenne se desarrolla. Al
final de este informe, la aparición de un codón de parada prematuro es mostrado
en un ejemplo de omisión de exón.
Las diferentes estrategias para una terapia de distrofia muscular Duchenne.
La investigación trata de desarrollar una terapia para distrofia muscular
Duchenne con dos acercamientos genéticos o con muchas intervenciones
farmacológicas diferentes.
El primer acercamiento genético es el intento de introducir
nuevos genes de la distrofina en los núcleos de las células musculares que
podrían entonces otra vez dirigir la producción de distrofina. Muchos
experimentos en ratones han mostrado que esto puede ser conseguido usando un
virus modificado, "domesticado" el virus adeno-asociado, AAV, como un
transportador o vector para transferir las partes activas, los exones
combinados - el ADNc - del gen de la distrofina en las células musculares. Pero
el vector AAV no es lo suficientemente grande para contener el ADNc completo con
todos sus 79 exones. Solamente ADNc’s de un tercio del largo normal cabria
ellos. Esto significa que la nueva distrofina también tendrá solamente un tercio
de su tamaño normal. Si esta distrofina acortada tiene una de las estructuras
que causan la benigna distrofia Becker, el efecto de tal tratamiento no sería
una cura completa pero disminuiría la rápida distrofia Duchenne en una forma
Becker más benigna con prácticamente una expectativa de vida normal. Como el
reciente material genético no entra en los cromosomas de la célula, el gen de la
distrofina mutado no es cambiado, manteniéndose donde esta en el brazo corto del
cromosoma X.
El segundo acercamiento genético, la omisión de exón,
tampoco toca el gen dañado. Este solamente interfiere en el procesamiento de la
información genética desde el gen a la proteina. El empalmado de los exones del
ARNpre-m, para el ARNm, es alterado específicamente con el propósito de que sea
interrumpido, y el mensaje fuera del marco de lectura sea leíble otra
vez, dentro del marco. El resultado es el mismo que con la técnica de
transferencia génica: distrofia Duchenne alentada a distrofia Becker. Un
totalmente nuevo tipo de medicamento "fármacos genéticos", diseñado para cada
paciente especialmente, haciendo esta alteración de información: los
oligorribonucleótidos en antisentido.
Como ambos acercamientos genéticos son nuevos, la investigación debe seguir muy
cautelosamente. Aunque es tentador empujar las nuevas terapias a la aplicación
clínica rápidamente, es importante no cometer el error de comprometer la
seguridad que podría hacer retroceder el campo de terapia-génica entero. Por lo
tanto, en la aprobación de los procedimientos son muy estrictos y toman mucho
tiempo.
El tercer acercamiento terapéutico trata de combatir las
consecuencias no-genéticas de la ausencia de distrofina como la destrucción de
músculo por enzimas destructoras de proteina, membranas con filtraciones,
fibrosis, e inflamación. Hay varios fármacos, algunos de ellos ya en venta
contra otras enfermedades, que se espera tengan efectos beneficiosos sobre
distrofia Duchenne. En la sección sobre acercamientos farmacológicos los
resultados de investigación más recientes son resumidos y los cuales fueron
discutidos en la reunión.
Omisión de Exón
La técnica de omisión de exón trata de cambiar una mutación Duchenne en
una mutación Becker. Si una mutación altera el marco de lectura y causa por lo
tanto distrofia Duchenne, el marco de lectura puede ser restaurado
artificialmente retirando del ARN mensajero uno o más exones directamente antes
o después de la deleción, duplicación, o el exón que contiene una mutación
puntual.
Los exones pueden ser eliminados del ARNm con
oligorribonucleótidos en antisentido, AONs. Ellos son cortas estructuras de
ARN que constan de cerca de 20 nucleótidos cuyas secuencias son construidas en
tal manera de que se unen solamente en la secuencia complementaria dentro del
exón a ser removido o en sus fronteras y en ningún lugar más. En
antisentido quiere decir que su secuencia bases está en el orden contrario a
la secuencia objetivo en el ARNpre-m. Estos AONs interfieren así con la
maquinaria de empalmado con el fin de que los exones seleccionados no
sean más incluidos en el ARNm por lo tanto, son omitidos.
El gen mismo con su mutación no es alterado por la omisión
de exón, pero su ARNm no contiene más la información del exón o exones
omitidos. Como este ARNm es más corto que lo normal, la proteína de distrofina
es también mas corta, conteniendo menos aminoácidos. Si los aminoácidos
faltantes forman parte de regiones no-esenciales de la distrofina, como los
dominios de la varilla central (central rod), resultara una proteína más corta
que puede a menudo todavía realizar su rol estabilizador en la membrana de la
célula muscular. El resultado sería el cambio de síntomas severos Duchenne a los
síntomas muchos más leves de distrofia muscular Becker.
Los oligonucleótidos son piezas cortas de dos clases
de ácidos nucleicos, ADN y ARN, (oligo significa pocos). Las dos hebras de
ADN, el ácido desoxirribonucleico, constan cada una de una cadena de fosfato
alternado con unidades de desoxirribosa, su estructura principal. La
desoxirribosa es una molécula de azúcar con cinco átomos de carbono, y en el
segundo átomo de carbono su usual átomo de oxigeno esta faltante. Cada unidad de
azúcar lleva una de las cuatro bases "genéticas" en su primer átomo de carbono.
En el ARN, el ácido ribonucleico, tiene unidades de ribosa
normales en su estructura principal con un oxígeno en su segundo átomo de
carbono. Los nucleótidos son los bloques de construcción en ambas clases
de ácidos nucleicos. Cada nucleótido consta de una ribosa, una base y un
fosfato. Así que hay cuatro diferente ribonucleótidos y cuatro diferente
desoxirribonucleótidos.
Lo dos tipos de oligos o AONs usados en la omisión de exón,
son oligorribonucleótidos protegidos con el propósito de que no sean destruidos
en las células musculares por nucleasas, enzimas, que destruyen ácidos
nucleicos.
Los científicos holandeses están usando los
20-metil-fosfotioatos, también llamados metil-tioatos o 2O-metilos.
Ellos tienen un grupo metilo, un carbono con tres átomos de hidrógeno, unido al
oxígeno del segundo carbono de las unidades de ribosa y un átomo de azufre en
lugar de uno de los átomos de oxígeno de los grupos de fosfato. Los
morfolinos que investigadores británicos-australianos están usando, tienen
uno de los oxígenos del fosfato reemplazado con un grupo dimetil ámido, un
nitrógeno con dos grupos metilos, y las unidades enteras de ribosa son
reemplazadas por anillos morfolinos, seis anillos unidos, cada uno consiste de
cuatro átomos de carbono, uno de oxígeno y un átomo de nitrógeno con átomos de
hidrógeno unidos a los carbonos.
Muchos más detalles sobre la omisión de exón son hablados en
la entrevista con el Dr. Wilton al final de este informe. Y en la última
página, la omisión del exón 46 para restaurar el marco de lectura después de la
supresión del exón 45 es mostrado como un ejemplo de esta técnica.
Omisión de exón: las primeras pruebas clínicas con niños con Duchenne en
Holanda. Prosensa B.V. es una compañía biotecnológica en Leiden en Holanda
que actualmente desarrolla una terapia para distrofia muscular Duchenne usando
la técnica de omisión de exón en cooperación con los Drs. Gertjan van Ommen y
Judith van Deutekom del Centro Médico de la Universidad de Leiden.
Gerard Platenburg, el presidente de Prosensa, anunció el 8 de mayo del
2006, que dos comités reguladores holandeses – el CCMO e IRB - dieron el permiso
de "un estudio exploratorio sobre la eficacia, seguridad, y tolerancia de una
sola dosis intramuscular de un oligorribonucleótido en antisentido, AON, para
restituir la producción de distrofina". Esto abrió el camino para la primera
prueba de omisión de exón en humanos que está comenzando ahora.
Para esta prueba, seis niños con Duchenne, de 8 a 16 años de
edad, todos de Holanda, han sido escogidos. Tienen una mutación en el gen de la
distrofina que causa un cambio en el marco de lectura que podía ser restaurado
omitiendo el exón 51. Después de pruebas clínicas intensivas, incluyendo
biopsias de piel, el fármaco potencial, llamado AON 2O-metilo que se dirige
contra el exón 51 será aplicado en una inyección en un solo músculo, el
tibialis: un músculo anterior de la espinilla. Los pacientes serán inyectados
secuencialmente, p.e. solamente después de que ningún efecto secundario apareció
en un chico el próximo chico será tratado. Cuatro semana después de la
inyección, una biopsia de músculo será tomada y el material analizado para
proteina distrofina acortada. El objetivo principal de esta primera prueba es
probar que la omisión de exón es segura y trabaja en pacientes con Duchenne como
se esperaba después de los muchos experimentos pre-clínicos exitosos con
cultivos de músculo y animales. Incluso si la nueva distrofina es encontrada en
el un músculo tratado, los chicos no tendrán ningún beneficio terapéutico de
este tratamiento local.
Los investigadores holandeses han escogido los
2’-O-metilo-fosfotioato AONs, también llamados 2O-metilos, porque tienen extensa
experiencia con este tipo de AONs, no sólo con inyecciones directamente en el
tejido muscular sino también con la aplicación sistémica en animales vivos. Por
ejemplo, después de repetidas inyecciones de 2O-metilo contra el exón 23 de
ratón en la vena de la cola de ratones mdx, cantidades cuantiosas terapéuticas
de distrofina acortada aparecían en todos los músculos esqueléticos y del
corazón.
El hecho de que los 2O-metilos entran también en los músculos cardíacos es
importante, porque no ha sido posible aún que la otra clase de AONs
extensivamente evaluados, los morfolinos, lleguen al corazón.
También ha sido mostrado que los 2O-metilos son tomados más
fácilmente por las células musculares distróficas que por las normales,
presumiblemente porque hay "agujeros" en las membranas distróficas. En los
ratones mdx, el efecto sistémico de omisión con 2O-metilos dura varios meses,
que es una señal de que una futura terapia de omisión de exón tendría que ser
repetida todos los meses posiblemente. Sin embargo, la dosis exacta y la
frecuencia queda ser determinada.
Debido a los muy prometedores resultados sistémicos
pre-clínicos, los investigadores holandeses ya están preparando el próximo
ensayo clínico con chicos con Duchenne programado para el 2007, durante el que
tratarán de omitir el exón 51 y 46 por la aplicación sistémica del AON 2O-metilo
apropiado.
Estas pruebas de corto plazo serán seguidas por pruebas a largo plazo, al menos
probablemente seis meses en los que posiblemente podría disminuir la velocidad
de los síntomas de Duchenne de los niños significativamente.
Los dos exones a ser omitidos en las dos primeras pruebas han
sido escogidos, porque una exitosa omisión del exón 51 sería una terapia para
hasta el 24 % de todos los chicos con Duchenne con deleciones, y omitir el exón
46 ayudaría a todos los chicos con una deleción del exón 45, el exón más
frecuentemente eliminado de pacientes de Duchenne (8 % de todas las deleciones).
En adición a los AONs para omitir los exones 51 y 46,
Prosensa ha desarrollado y también producido cantidades suficientemente grandes
otros cuatro 2O-metilos. Estos seis AONs permitirían tratar a más del 50 % de
todos pacientes con deleciones.
Si todo se va según lo planeado, tomará aproximadamente cuatro a cinco años,
hasta que los AONs 2O-metilo para la omisión del exón 51 y 46 esten listos para
ser comercializados como un tratamiento de Duchenne. Para el desarrollo completo
de AONs adicionales se espera sea más rápido porque la experiencia con los
primeros dos acortará considerablemente el tiempo para la aprobación y
evaluación de los siguientes.
El Dr. Platenburg espera poder informar sobre los resultados
de esta primera prueba de omisión de exón en el próximo encuentro del Parent
Project en el 2007.
Omisión de exón: Preparación de una prueba clínica con chicos con Duchenne en
el Reino Unido. En el Reino Unido, el consorcio MDEX fue creado para
desarrollar la técnica de omisión de exón y realizar estudios clínicos, para así
acortar tanto como sea posible el tiempo hasta que una terapia este disponible
para todos los pacientes con Duchenne. Con el primer estudio clínico, los
investigadores tratarán de omitir el exón 51 del ARN mensajero de la distrofina
en nueve niños con Duchenne. Los miembros del consorcio son Francesco
Muntoni, Kate Bushby, Jenny Morgan, Dominic Wells, George Dickson, Ian Graham,
Matthew Wood, y Jenny Versnel, todos son activos en la investigación en
Duchenne. El Ministerio de Salud y el Concejo de Investigación Médica del R.U.
están también involucrados.
Uno de los miembros de MDEX, Kate Bushby de la
Universidad de Newcastle una vez Tyne, habló de los detalles de la próxima
prueba y menciono que al principio habrá cooperación cercana con algunos grupos
de investigación fuera del R.U. y especialmente con el grupo holandés en Leiden.
Varios años de investigación pre-clínica han mostrado que los
oligorribonucleótidos en antisentido, AONs, pueden "forzar" al gen de la
distrofina mutado a que haga una proteina más corta, una distrofina Becker, que
haría los síntomas distróficos graves de chicos con Duchenne mucho más leves.
Aplicaciones sistémicas de estos AONs para ratones distróficos vivos
prácticamente "curaron" a estos animales de su enfermedad. Y como los AONs ya
han sido usados por años para combatir otras enfermedades, se sabe que son
seguros y no tóxicos. Estos resultados seguros han convencido a los científicos
británicos de iniciar al final de este año un estudio clínico paralelo a los
estudios que son llevados a cabo ya en Leiden.
Para la primera prueba de MDEX, varias decisiones ya han sido
tomadas: el exón a ser omitido será el exón 51, porque muchas mutaciones
Duchenne son deleciones entre los exones 45-50, 47-50, 48-50, 49-50, 50, 52,
52-63, aproximadamente el 17 % de todas las deleciones Duchenne, podrían ser
tratadas al omitir el exón 51. El AON a ser usado será el AON H51A, uno de los
morfolinos desarrollado por el laboratorio de Steve Wilton en Perth en
Australia contra el exón 51 humano. Nueve niños con Duchenne, de 12 a 18 años de
edad, participarán. Tres dosis diferentes: 0.09, 0.297, y 0.9 mg del AON en 0.9
ml de solución será usado, aplicado en un volumen de 1 cm3 de músculo con nueve
inyecciones directamente en el tejido muscular. El músculo objetivo será uno de
los dos músculos extensor digitorum brevis, EDB, en el exterior del pie
que levantan los dedos del pie. Los seres humanos no los necesitan realmente y
muchos no los tienen ni siquiera. Así que puede ser retirado el músculo sin
consecuencias serias si algunos efectos secundarios inaceptables ocurren.
Chequeos clínicos extensivos incluyendo biopsias serán hechos antes y cinco
semana después de las inyecciones en cada chico como es usual en los ensayos
clínicos para valorar los resultados del tratamiento.
Los objetivos principales de la prueba son verificar que la
administración local AON morfolino en un solo músculo humano sea segura y que
eficaz en restituir por lo menos algo de la producción de distrofina. Se espera
que con las diferentes dosis usadas, aparezca distrofina en más del 10 % de las
fibras musculares. Esto permitiría conseguir resultados confiables y también
calcular la cantidad total de AONs necesarios para tratar todos los músculos de
un chico en un futuro tratamiento sistémico.
Los chicos participantes en esta primera prueba con morfolinos inyectado a nivel
local no darán ningún beneficio terapéutico. Pero todos los resultados de esta
prueba serán necesarios para un tratamiento real, para una aplicación sistémica
de los potenciales fármacos para Duchenne en la circulación sanguínea de un niño
para que todos sus músculos puedan ser alcanzados. Esta segunda prueba más
importante está siendo planeada para el 2007.
Omisión de exón trabaja en ratones y perros, pero todavía hay muchas
preguntas que responder antes que la omisión de exón esté lista para los chicos.
Terence Partridge, actualmente trabaja en el Centro Médico Infantil
Nacional en Washington planteó varias preguntas que deben ser respondidas tarde
o temprano antes de que la omisión de exón pudiera volverse una terapia eficaz
para chicos con distrofia Duchenne. E informó que en la omisión de exón en Japón
demostró estar trabajando después de la inyección local de AONs en músculos de
perros distróficos.
Sabemos que la omisión de exón en ratones mdx trabaja bien
con AONs morfolinos contra su exón 23 inyectados sistémicamente en la cola de la
vena. Por ejemplo, después de siete inyecciones semanales, los músculos lucen
mucho mejores, no tienen más filtraciones sus células y por lo tanto, los
valores de CK del serum sanguíneo se ponen casi normales. Pero no sabemos que
tanto los AONs son distribuidos uniformemente en todos los músculos para que así
mejoren todos al mismo tiempo. Ya sabemos que los morfolinos desafortunadamente
no omiten el exón 23 en los músculos del corazón. De forma semejante, la otra
clase de AONs, los 2O-metilos, también tienen un poco de problema en afectar los
músculos del corazón. ¿Cuál es la razón para este fracaso?
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